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大鼠核因子kb受体活化因子配体(RANKL)ELISA试剂盒供应商

点击次数:1358 发布时间:2013/9/11
提 供 商: 上海研盟生物科技有限公司 资料大小:
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大鼠核因子kb受体活化因子配体(RANKL)ELISA试剂盒供应商

 

使用目的:

本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中核因子kb受体活化因子配体( RANKL含量
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠核因子kb受体活化因子配体( RANKL水平。用纯化的大鼠核因子kb受体活化因子配体( RANKL抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入核因子kb受体活化因子配体( RANKL),再与HRP标记的核因子kb受体活化因子配体( RANKL抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的核因子kb受体活化因子配体( RANKL呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠核因子kb受体活化因子配体( RANKL浓度。

 

标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1.         标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

800 pmol/L
5号标准品
150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
400 pmol/L
4号标准品
150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
200 pmol/L
3号标准品
150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
100 pmol/L
2号标准品
150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
50 pmol/L
1号标准品
150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  
4.         配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.         温育:操作同3。
8.         洗涤:操作同5。
9.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

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